射頻功率放大器在**細胞表面EGFR研究中的應用

實驗名稱:超聲激卟啉對s180**細胞表面egfr表達量的影響
研究方向:生物醫療
測試目的:
血卟啉是從血紅蛋白中提取的**光敏劑,其本身無效應,但它可以在動物和人的多種**組織**聚集,易為聲光輻射處理,當它被聲光后能產生強烈的效應。美國利用光,這種方法被稱為光動力學療法,簡稱pdt。光動力學療法在臨床主要應用于人體表面淺層的**。光在生物組織中的穿透能力差,使其對深部的**受到限制。超聲聯合血卟啉對小鼠移植**生長抑制有協同效應,發現單用血卟啉無抑制作用,單用超聲僅有輕微抑制作用,而兩者聯合則有明顯的抑制效果,并將之命名為聲動力學療法。超聲是一種彈性機械波,其在生物組織中的穿透能力比激光強,同時超聲能夠聚焦于特定部位。聲動力療法對于**細胞有較強的針對性,對正常組織,組織穿透力強,并且機體不產生耐受性,可以反復多次**,因而它對于**,特別是組織深層**有著較好的應用前景。有學者認為sdt或細胞的部分機理是通過超聲的熱效應來實現的,但是大量的實驗結果提示,sdt可能較主要地與超聲聚集在癌組織的血卟啉產生單線態氧有關。
測試設備:ata-8202射頻功率放大器、昆明系小白鼠、艾氏腹水**細胞系、超聲探頭、血卟啉衍生物為單羥乙基單次卟啉、細胞色素c和bax單抗體、caspase-3單抗體、鏈霉卵白素sp試劑盒。
實驗過程:
接種:s180腹水瘤細胞于6只小鼠腹腔1周后,隨機取3只小鼠,抽取腹水細胞,分別置于醫用薄壁試管,加入rpmi1640+10%小牛培養基中,于37℃孵箱培養,實驗時用生理鹽水調整細胞濃度至2x106個/ml。每只小鼠抽取的腹水細胞分為12管,分為四組,分別為對照組(ct)、血卟啉組(h)、超聲組(u)和超聲加血卟啉組(uh),每組三管,每管0.5ml細胞懸液。h組和uh組每管中加入血卟啉4ul,使其終濃度為0.01mg/ml,37℃co2孵箱孵育,45min后u組和uh組分別在頻率為1.8mhz,強度為2w/cm2的超聲裝置中聲照處理3min,各實驗組分別于聲照后1h、3h、5h取材,常規細胞涂片。
*組織化學染色:以sp法進行*組織化學染色:細胞涂片固定后加3%處理15min,除去內源性酶pbs洗3次,加正常動物30min以減少非特異性染色,加egfr一抗4℃過夜,pbs代替一抗作為陰性對照。sp染色按試劑盒說明進行,dab顯色,梯度酒精脫水,中性樹膠封固蓋片。
陽性結果觀察:各組隨機選取10個高倍視野,利用數碼顯微成像系統進行圖像采集和分析。imagepro-plus5.0圖像分析軟件測定各組照片的平均光密度od值(0~255)(用平均光密度表示陽性細胞表達強度,平均光密度值越大則表達越強)。組間t檢驗顯示組間差異。
實驗結果:
由表中數據可以看出,超聲激卟啉處理1h后,uh組、u組平均光密度值明顯**ct組、h組,且uh組平均光密度值**u組,經組間t檢驗,uh組與其它組差異較顯著(p<0.01);超聲激卟啉處理3h后,uh組平均光密度值小幅度下降,ct組、h組基本無變化,u組平均光密度下降。
表1egfr在超聲處理1h、3h、5h后平均光密度值比較(*10-2)
圖1egfr在超聲處理1h、3h、5h后平均光密度值比較(*10-2)
安泰ata-8202射頻功率放大器:
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