ISH-武漢思特進

根據不同的雜交實驗要求，應選擇不同的核酸探針。在大多數情況下，可以選擇克0隆的dna或cdna雙鏈探針。但是在有些情況下，必須選用其它類型的探針如寡核苷酸探針和rna探針。例如，在檢測靶序列上的單個堿基改變時應選用寡核苷酸探針，在檢測單鏈靶序列時應選用與其互補的dna單鏈探針（通過克0隆人m13噬菌體dna獲得）或rna探針，ish，寡核苷酸探針也可。長的雙鏈dna探針特異性較強，適宜檢測復雜的靶核苷酸序列和病原體 ，但不適宜于組織原位雜交，因為它不易透過細胞膜進入胞內或核內。在這種情況下，寡核苷酸探針和短的pcr標記探針（80～150bp）具有較大的優越性。
雜交液中的陽離子濃度通過靜電排斥作用影響了雜交體之間的鏈穩定性，較高的鹽濃度將增加雜交體的穩定性。大于0.4m的na離子濃度，對tm值、雙鏈復性速率的影響不大，但隨著na離子濃度的降低，將顯著影響tm值和雙鏈復性速率。
有2機溶2劑（甲酰胺）的作用是降低dna-dna和dna-rna等雙鏈體的解鏈溫度。通常dna需要在0.1~0.2m na 90~100℃的條件下變性，那么應用于原位雜交，樣品必須在65~75℃的條件下進行長時間變性，這將導致樣品形態學的*。50%甲酰胺的應用能將雜交溫度降至30~45℃。
*葡聚糖具有很強的水合性，高濃度的*葡聚糖會使得核酸分子無法獲得周邊親水環境，增加了探針濃度，加快雜交反應速率。
原位雜交是指；分子雜交的一種形式。由未經抽提分離的染色體dna，在原來位置上被變性成單鏈后，與探針進行分子雜交。1977年由本頓(w.d.be*n)和戴維斯(r.w.d*is)在原分子雜交基礎上發展的一種較新的分子雜交技術。方法是將菌落或噬菌斑轉移到硝9酸纖維素濾膜上，使在原位發生溶菌后變性的dna，同濾膜原位結合，再與有放5射性同位素標記的特定核苷酸“探針”雜交，其結果可用放5射自顯影來顯示，出現銀粒的地方便是待測染色體dna上與探針互補順序所在的位置。對快速檢測轉化群落中的dna序列或任何一種插入的dna序列，以及動植物的*定位工作，都具有廣泛應用價值。(見“分子雜交”、“放5射自顯影”、“影印培養技術”)
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